產(chǎn)品規(guī)格
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Firefly&Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以D-熒光素鉀鹽為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因的活性，之后在淬滅該螢光反應(yīng)的同時(shí)，以腔腸素-h 為底物檢測(cè)海腎螢光素酶報(bào)告基因的活性。該試劑盒具有靈敏度高的特點(diǎn)，可在單個(gè)樣品中同時(shí)檢測(cè)螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶的活性，適用于雙報(bào)告基因檢測(cè)。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
FRK001/100T | FRK002/500T |
FRK001-A/FRK002-A | 細(xì)胞裂解液 | 20 mL | 100 mL |
FRK001-B/FRK002-B | 螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑 | 10 mL | 50 mL |
FRK001-C/FRK002-C | 海腎熒光素酶檢測(cè)緩沖液 | 10 mL | 50 mL |
FRK001-D/FRK002-D | 海腎熒光素酶底物（100×） | 100 μL | 500 μL |
保存條件
干冰運(yùn)輸；-20℃保存，12 個(gè)月有效。
海腎熒光素酶底物（100×）建議分裝 -80℃保存。
使用說(shuō)明
1.裂解細(xì)胞：將細(xì)胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入報(bào)告基因細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
a.對(duì)于貼壁細(xì)胞：吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液；對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心去上清后，參考下表加入適量報(bào)告基因細(xì)胞裂解液。
器皿類(lèi)型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
細(xì)胞裂解液（微升/孔） | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
冰上孵育5-10 min ，充分裂解細(xì)胞。
注：如果螢光素酶的表達(dá)水平比較低，可以嘗試使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小為100微升。
b.充分裂解后，10,000-15,000×g 離心3-5分鐘，取上清用于測(cè)定。（選做）
注：細(xì)胞裂解后可以立即測(cè)定螢光素酶，也可以先凍存，待以后再測(cè)定。凍存樣品需融解，并達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。裂解產(chǎn)物可在4℃保存12 h，-20℃/-80℃可長(zhǎng)期存放。（裂解產(chǎn)物反復(fù)凍融5次無(wú)影響）。
2.融解螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑和海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液，并達(dá)到室溫。海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)置于冰浴或冰盒上備用。
3.按照每個(gè)樣品需100微升檢測(cè)液的量，取適量海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液，按照1:100加入海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)配制成海腎螢光素酶檢測(cè)工作液。例如，1毫升海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液中加入10微升海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)充分混勻后即可配制成約1毫升海腎螢光素酶檢測(cè)試劑。
4.取20 μL裂解液加至待檢測(cè)的96孔板中，按照實(shí)驗(yàn)需求，可設(shè)置3-5個(gè)重復(fù)孔。
5.加入100 μL螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑，震板混勻，檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在30 min內(nèi)完成。
6.加入100 μL海腎熒光素酶檢測(cè)試劑，震板混勻，檢測(cè)海腎熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在30 min內(nèi)完成。
7.分析數(shù)據(jù)：
①實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，在每個(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對(duì)照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對(duì)照組的螢火蟲(chóng)和海腎螢光素酶的發(fā)光測(cè)量值。
a.空白對(duì)照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑。
背景R：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑+海腎螢光素酶檢測(cè)試劑。
注：空白對(duì)照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測(cè)試劑。
b.實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理(即實(shí)驗(yàn)組F和實(shí)驗(yàn)組R)。
c.對(duì)照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果(即對(duì)照組F和對(duì)照組R)。
②計(jì)算結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)組比值=(實(shí)驗(yàn)組F-背景F）/(實(shí)驗(yàn)組R-背景R)。
對(duì)照組比值=(對(duì)照組F-背景F）/(對(duì)照組R-背景R)。
表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組比值/對(duì)照組比值。
注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，加樣檢測(cè)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用；
2.檢測(cè)儀器：能檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測(cè)得的光信號(hào)值也會(huì)不同；
3.檢測(cè)板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板。黑色酶標(biāo)板也可用，但因黑色會(huì)吸收光信號(hào)，可能會(huì)降低信號(hào)；
4.D組分海腎螢光素酶底物易揮發(fā)，注意密封保存；
5.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。
6.本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑盒 | FLK001/FLK002 | 100T/500T |
NLuc熒光素酶檢測(cè)試劑盒 | NLK001/NLK002 | 100T/500T |