產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 售價 |
螢火蟲熒光素酶檢測試劑盒 Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit | FLK001 | 100T | ￥500.00 |
螢火蟲熒光素酶檢測試劑盒 Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit | FLK002 | 500T | ￥1000.00 |
產(chǎn)品簡介
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為 61 kDa 的蛋白，在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化熒光素（luciferin）氧化成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的過程中會發(fā)出波長為 560 nm 左右的生物螢光，該螢光可通過化學發(fā)光儀進行測定。
Firefly Luciferase reporter gene Assay Kit 具有靈敏度高的特點，可以高靈敏地檢測螢火蟲熒光素酶在哺乳動物細胞中的表達。
保存條件
-20℃保存，有效期一年。螢火蟲熒光素酶檢測試劑建議分裝-20℃或-80℃保存。
操作流程
1.裂解細胞：將報告基因細胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入細胞裂解液，充分裂解細胞。
（1）對于貼壁細胞：吸盡細胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報告基因細胞裂解液；
對于懸浮細胞：離心去上清后，參考下表加入適量報告基因細胞裂解液。冰上孵育10 min，充分裂解細胞。
細胞培養(yǎng)板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
裂解液加入量 | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 300 μL | 500 μL |
【注】：裂解產(chǎn)物可室溫保存6 h；4℃保存18 h；-80℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復凍融），本試劑盒裂解液數(shù)量按照24孔板添加量進行配制。
（2）充分裂解后，10,000-15,000 rpm 離心1min，取上清用于測定。（選做）
2.按儀器操作說明書開啟化學發(fā)光儀或具有檢測化學發(fā)光功能的多功能酶標儀，可以設定參數(shù)為測定時間10 sec，測定間隔2 sec，或者根據(jù)儀器設備的要求并根據(jù)實驗需要設置適當?shù)拈g隔時間和測定時間。
3.每個樣品測定時，取20 μL裂解液加入測量管中（保持每次樣品的加樣量一致），取等體積的細胞裂解液作為空白對照，另外加入100 μL螢火蟲螢光素酶檢測試劑，充分混勻后測定RLU（Relative light unit）。
4.分析數(shù)據(jù)
（1）實驗設計：根據(jù)不同實驗目的，在每個培養(yǎng)板中都應設置對照組、實驗組和空白對照組。為了保證實驗準確性，理論上每個實驗組（包括對照組）都應當減去空白對照組的螢火蟲螢光素酶的發(fā)光測量值。
①空白對照組：
背景F：未轉染細胞+螢火蟲熒光素酶檢測試劑。
注：空白對照組的樣品量必須與實驗樣品量相同，包含與實驗樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測試劑。
②實驗組：轉染細胞經(jīng)實驗化合物處理（即實驗組F）。
③對照組：轉染細胞不經(jīng)處理，用以標準化結果（即對照組F）。
（2）計算結果：
實驗組=實驗組F-背景F。
對照組=對照組F-背景F。
表達倍數(shù)=實驗組/對照組。
注意事項
1. 酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用；
2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾；
3. 檢測儀器：能檢測化學發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同；
4. 單管熒光測定儀測定，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應保持一致；
5. 為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護；
6. 本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！
試劑盒數(shù)據(jù)
